حاولت الدراسة أن تنمو فيروسات حية من عينة "إيجابية". في 69 بالمائة من الحالات لم تستطع فعل ذلك

56٪ من العينات المأخوذة من البالغين و 79٪ من الأطفال لا تحتوي على فيروسات حية

ملاحظة المحرر: وهذا مع الدراسة فقط باستخدام عينات ذات دورات منخفضة جدًا تحت 25 عامًا للأطفال وتحت 18 عامًا للبالغين. عادةً سوف يتم اعتبارك "إيجابيًا" حتى عندما يتم العثور على جزء الفيروس فقط عند 35 أو حتى 45 دورة (تكرار).


ملخص

 

خلفية: دور الأطفال في انتقال وانتشار فيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة 2 (SARS-CoV-2) غير واضح. نحن نهدف إلى تحديد مدى عدوى السارس- CoV-2 في عينات البلعوم الأنفي من الأطفال مقارنة بالبالغين.

 

أساليب: حصلنا على مسحات من البلعوم الأنفي من البالغين والأطفال المصابين بمرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) ومن مخالطيهم الذين ثبتت إصابتهم بفيروس SARS-CoV-2 في مانيتوبا بين مارس وديسمبر 2020. قارنا النمو الفيروسي في ثقافة الخلية وقيم عتبة الدورة من تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT-PCR) لجين مغلف SARS-CoV-2 (E) والجرعة المعدية بنسبة 50 ٪ من زراعة الأنسجة (TCID50/ مل) بين البالغين والأطفال.

 

النتائج: من بين 305 عينة إيجابية لـ SARS-CoV-2 بواسطة RT-PCR ، كانت 97 عينة من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 10 سنوات أو أقل ، و 78 كانت من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 عامًا و 130 من البالغين (≥ 18 عامًا). كان النمو الفيروسي في المزرعة موجودًا في 31٪ من العينات ، بما في ذلك 18 (19٪) عينة من الأطفال بعمر 10 سنوات أو أقل ، و 18 (23٪) من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 عامًا و 57 (44٪) من البالغين (الأطفال مقابل البالغين ، نسبة الأرجحية 0.45 ، فاصل الثقة 95٪ [CI] 0.28-0.72). كانت عتبة الدورة 25.1 (95٪ CI 17.7–31.3) في الأطفال بعمر 10 سنوات أو أقل ، 22.2 (95٪ CI 18.3–29.0) في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 سنة و 18.7 (95٪ CI 17.9–30.4) في البالغين (p <0.001). وسيط TCID50/ مل كان أقل بشكل ملحوظ في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 عامًا (316 ، النطاق الرباعي [IQR] 178-2125) من البالغين (5620 ، معدل الذكاء 1171 إلى 17 ، p <0.001). كانت عتبة الدورة مؤشرا دقيقا للثقافة الإيجابية في كل من الأطفال والبالغين (المنطقة الواقعة أسفل منحنى المشغل المستقبل ، 0.87 ، 95٪ CI 0.81–0.93 v. 0.89 ، 95٪ CI 0.83–0.96 ، p = 0.6).

 

ترجمة: مقارنة بالبالغين ، كان الأطفال الذين لديهم مسحات من البلعوم الأنفي ثبتت إصابتهم بفيروس SARS-CoV-2 أقل عرضة للإصابة بالفيروس في المزرعة ، وكان لديهم عتبات دورة أعلى وتركيزات فيروسية أقل ، مما يشير إلى أن الأطفال ليسوا الدوافع الرئيسية لـ SARS-CoV-2 انتقال.

كان لفيروس كورونا 2 (SARS-CoV-2) والمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS-CoV-2019) وتدخلات الصحة العامة غير الصيدلانية للسيطرة عليه تأثير كبير على المجتمع. استخدمت جهود الصحة العامة الموجهة للحد من انتشار مرض فيروس كورونا 19 (COVID-XNUMX) عددًا من NPIs ، بما في ذلك تعليق الحضور الشخصي للأطفال في سن المدرسة. استندت هذه القرارات إلى حد كبير على الملاحظات التاريخية أن الأطفال لعبوا دورًا جوهريًا كمحركين لانتقال فيروسات الجهاز التنفسي الوبائية ، مثل الإنفلونزا.1 في حالة SARS-CoV-2 ، لا يزال دور الأطفال في انتقال العدوى غير واضح ، نظرًا لقلة الدراسات التي تحتوي على بيانات متضاربة.2-9 اقتصرت معظم الدراسات على التحقيقات الوبائية التي من الصعب تحديد اتجاه انتقال العدوى.3-7,9 كخط بديل للأدلة ، حققت بعض الدراسات في دور الديناميكيات الفيروسية لـ SARS-CoV-2 ، وأيضًا مع نتائج غير متجانسة. من بين هذه الدراسات ، أظهر البعض حمولات فيروسية أعلى في البلعوم الأنفي لأفواج الأطفال بناءً على اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل ، بينما أظهر البعض الآخر مستويات مماثلة من SARS-CoV-2 في الأطفال والبالغين.2,8,10,11 علاوة على ذلك ، أظهرت الأدلة المتعلقة بالفيروسات الأخرى أن الحمض النووي الريبي الفيروسي القابل للاكتشاف يمكن أن يستمر إلى ما بعد العدوى.3,4 من البدائل المهمة للعدوى في الجسم الحي استعادة الفيروس الحي في مزرعة الخلية. كان تقييم هذا البعد الحرج مفقودًا في جميع دراسات طب الأطفال تقريبًا ، مما يحد من القدرة على إجراء تحليل أكثر اكتمالاً للمخاطر والفوائد عند النظر في دور الأطفال في انتقال فيروس كورونا المستجد SARS-CoV-2. تُظهر الأدلة أنه يمكن التنبؤ بإصابة SARS-CoV-2 باستخدام البيانات المتاحة ، مثل عتبة الدورة من تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT-PCR).12,13 عتبة الدورة هي مقياس نسبي لكمية المادة الوراثية ، مع وجود قيم أقل تشير إلى وجود المزيد من المواد الوراثية الفيروسية في العينة.

نظرًا لأن عددًا متزايدًا من الولايات القضائية يأخذ في الاعتبار ما إذا كان يجب أن يستمر التعلم داخل المدرسة ، والرعاية النهارية والأنشطة اللامنهجية ، أو استئنافها ، فإن الفهم الأفضل للمساهمات النسبية للأطفال والمراهقين في انتقال فيروس SARS-CoV-2 ، عند مقارنته بالبالغين ، يعد أمرًا ضروريًا. هذا مهم بشكل خاص نظرًا لزيادة احتمالية الإصابة بالعدوى بدون أعراض في هذه المجموعة.14,15 كان هدفنا هو تحديد معدلات إيجابية ثقافة SARS-CoV-2 من مسحات البلعوم الأنفي الإيجابية للفيروس بعد اختبار RT-PCR عند الأطفال. ثم قمنا بتمييز الحمل الفيروسي والمعايرات في عينات إيجابية الزرع وقارننا ذلك مع مجموعة البالغين.

طرق

دراسة السكان والتصميم

اعتبارًا من يوليو 2020 ، شهدت مقاطعة مانيتوبا ، كندا (عدد سكانها 1.4 مليون) تفشي COVID-19 على نطاق واسع. في محاولة للحد من انتقال العدوى ، تم إجراء اختبار شامل لمخالطي الحالات. يتم توفير تعريفات حالات COVID-19 وجهات اتصال الحالة في الملحق 1 ، المتاح على www.cmaj.ca/lookup/doi/10.1503/cmaj.210263/tab-related-content.

حصلنا على مسحات من البلعوم الأنفي من مرضى مصابين بـ COVID-19 وجهات اتصالهم. تم إجراء اختبار RT-PCR بواسطة مختبر مقاطعة Cadham ، وهو المختبر المرجعي لاختبار SARS-CoV-2 في مانيتوبا. تم جمع العينات في مواقع اختبار COVID-19 ونقلها في وسط نقل فيروسي إلى المختبر ، عادةً بعد 1-4 أيام من الجمع. في المختبر ، تم تخزين العينات في 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة حتى تم اختبارها كما هو موضح سابقًا.12 تم اختبار جميع العينات باستخدام اختبارات مطورة معمليًا لتقليل اختلاف عتبة الدورة.

لقد قدمنا ​​جميع العينات المأخوذة من الأطفال المصابين بفيروس SARS-CoV-2 بعد RT-PCR لزراعة الخلايا من مارس إلى أغسطس 2020. ومع زيادة أعداد الحالات ، تم تقديم عينة ملائمة من العينات الإيجابية إلى مختبر الأحياء الدقيقة الوطني لتحليل ثقافة الخلية. اخترنا عينات من عينات الأسبوع السابق لضمان نضارة وبالتالي زيادة الغلة من زراعة الخلايا. في نوفمبر ، اخترنا عمدًا عينات أطفال ذات حد دورة أقل من 25 لتأكيد ملاحظتنا الأولية بأن معدلات إيجابية الثقافة كانت أقل من عينات البالغين (جميع عينات الأطفال من 27 مارس إلى 8 نوفمبر 2020). تم تحديد قيم عتبة الدورة التي تقل عن 25 مسبقًا للحصول على إنتاجية أعلى للثقافة.12 في الوقت نفسه ، اخترنا عينة ملائمة من عينات البالغين بقيم حد دورة تبلغ 25 أو أقل للمقارنة. قبل التحليل النهائي لثقافة الخلايا ، اخترنا عينة ملائمة من عينات البالغين (تم جمعها من 12 مارس إلى 14 ديسمبر 2020) لزراعة الخلايا من نفس المناطق الصحية مثل عينات الأطفال.

نتائج

كانت نتائجنا الرئيسية هي معدلات إيجابية الثقافة ، قيم عتبة دورة RT-PCR ، الجرعة المعدية بنسبة 50٪ لزراعة الأنسجة (TCID50/ مل) ، والحمل الفيروسي (نسخ سجلات الحمض النووي الريبي / مل) والأعراض لوقت الاختبار. بالنسبة لجميع العينات الإيجابية ، حصلنا على قيم عتبة دورة RT-PCR لجين غلاف SARS-CoV-2 (E). حصلنا أيضًا على قيم عتبة الدورة لجين RNAse P البشري ، وهو عنصر تحكم تضخيم داخلي داخلي يستخدم كمؤشر لجودة عينة البلعوم الأنفي.

TCID50مقايسة / مل هي طريقة واحدة لقياس عيار الفيروسات المعدية. على وجه التحديد ، فإنه يحدد كمية الفيروس المطلوبة لقتل 50٪ من خلايا زراعة الأنسجة ، وبالتالي ينتج عنه تأثير اعتلال خلوي. تم تخزين معظم العينات عند درجة حرارة -80 درجة مئوية لمدة أسبوعين قبل معالجتها للثقافة. تم تحديد العدادات الفيروسية للعينات بواسطة المختبر الوطني للأحياء الدقيقة (مستوى الاحتواء الحيوي 2) باستخدام TCID50مقايسات / مل (منهجية كاملة موصوفة في الملحق 1). باختصار ، تم وضع العينات المخففة بالتسلسل على خلايا فيرو واحتضانها لمدة 96-120 ساعة عند 37 درجة مئوية وفي 5٪ من ثاني أكسيد الكربون.2 قبل TCID50 تم قياسه.

يُقاس الحمل الفيروسي عادةً على أنه العدد اللوغاريتمي لنسخ جينوم الحمض النووي الريبي لكل مليلتر (نسخ سجلات الحمض النووي الريبي / مل) ، وهي قيمة كمية معيارية أكثر من عتبات الدورة. في هذه الدراسة ، ولتحديد كمية الحمض النووي الريبي الفيروسي الموجود في كل عينة ، أنشأنا منحنى قياسيًا باستخدام كمية معروفة من الحمض النووي الريبي الفيروسي أو الحمض النووي المنسوخ الذي تم تخفيفه بشكل متسلسل وتشغيله في نفس وقت عينات الاختبار لتوفير علاقة بين عتبة الدورة ونسخ الجينوم / مل (الملحق 1).

حددنا تاريخ ظهور الأعراض من خلال الصحة العامة وعلم الأوبئة والمراقبة والسجلات المختبرية. قمنا أيضًا بحساب عدد الأيام من بداية ظهور الأعراض إلى جمع العينات ، والمعروفة باسم الأعراض حتى وقت الاختبار ، بناءً على السجلات المختبرية (انظر الملحق 1).

تحليل احصائي

في عملنا السابق ،12 وجدنا أن البالغين لديهم نسبة إيجابية ثقافية تبلغ 28.9٪. لذلك ، طلبنا 164 عينة من طب الأطفال لاكتشاف فرق مهم سريريًا (معدل إيجابي أقل بنسبة 33 ٪ للثقافة بقوة 0.8 و α من 0.05) بين الأطفال.

نقدم البيانات الموزعة بشكل طبيعي مع الوسائل والانحرافات المعيارية ، ونقدم البيانات الموزعة بشكل غير طبيعي مع المتوسطات والنطاقات الربعية (IQRs). قمنا بتقييم الحالة الطبيعية باستخدام اختبار Kolmorgorov-Smirnov. أجرينا مقارنات بين المجموعات باستخدام الطالب t أو اختبار مان ويتني ، واستخدمت اختبار فيشر الدقيق للبيانات الفئوية. قارنا متوسطات المجموعة اللامعلمية باستخدام تحليل التباين Kruskal-Wallis. أجرينا انحدارًا لوجستيًا متعدد المتغيرات باستخدام أخطاء معيارية قوية لاختبار تنبئ الثقافات الإيجابية. اعتبرنا ثنائي الذيل p القيم الأقل من 0.05 ذات دلالة. أجرينا تحليلًا إحصائيًا باستخدام الإصدار 16.1 من Stata و GraphPad Prism 9.

موافقة الأخلاق

تم إجراء الدراسة وفقًا للبروتوكول HS23906 (H2020: 211) وتمت الموافقة عليه من قبل مجلس أخلاقيات البحث بجامعة مانيتوبا. تنازل مجلس الأخلاقيات عن الحاجة إلى الموافقة المستنيرة حيث تم الحصول على العينات كجزء من إدارة الصحة العامة والسريرية الروتينية ولم يتم أخذها خصيصًا لإدراجها في الدراسة الحالية.

النتائج

خلال فترة الدراسة ، تم إجراء حوالي 360 اختبار مسحة من البلعوم الأنفي في مانيتوبا ، منها حوالي 000 اختبار إيجابي لـ SARS-CoV-20. تضمنت العينة النهائية 000 عينة مستزرعة ، تمثل 2٪ من العينات الإيجابية في مانيتوبا و 305٪ (1.5 من 7.2) من العينات الإيجابية بين الأطفال. من بين 175 عينة من طب الأطفال تم استزراعها ، كانت 2440 عينة من أطفال في سن 175 سنوات أو أقل و 97 عينة من أطفال تتراوح أعمارهم بين 10 و 78 عامًا. تمت مقارنتها مع 11 عينة من البالغين. يتم عرض التركيبة السكانية الأساسية وعتبات الدورة وأحمال الحمض النووي الريبي الفيروسي في الجدول 1 و الجدول 2. نجحنا في زراعة الفيروس في 93 عينة من أصل 305 (31٪) ، بما في ذلك 57 من 130 بالغًا (44٪ ، 95٪ CI 35٪ -53٪). بالمقارنة ، قمنا بتربية الفيروس في 18 عينة فقط من بين 97 عينة في الأطفال الذين تبلغ أعمارهم 10 سنوات أو أقل (19٪ ، 95٪ CI 11٪ -28٪ ، p <0.001) و 18 عينة من 78 عينة في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 عامًا (23٪ ، 95٪ CI 14٪ -34٪ ، p = 0.003). لم يختلف معدل الثقافات الإيجابية بين الأطفال الصغار والكبار (p = 0.5). مقارنة بالبالغين ، كان لدى الأطفال احتمالات منخفضة بنسبة 55٪ لنمو فيروسات حية (نسبة الأرجحية 0.45 ، فاصل الثقة 95٪ 0.28-0.72). على الرغم من أن الأطفال الذين تبلغ أعمارهم 10 سنوات أو أقل كانوا أكثر عرضة للإصابة بعدوى بدون أعراض (47/97 ، 48٪) من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 عامًا (19/78 ، 24٪) أو البالغين (9/130 ، 7٪) (p <0.001 لجميع المقارنات) ، كان من المحتمل أيضًا أن يكون جميع الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 17 عامًا أو أقل بدون أعراض بغض النظر عما إذا كانت لديهم عينات إيجابية أو سلبية الثقافة (42 ٪ مقابل 37 ٪ ، p = 0.9).

جدول 1:

تدابير عدوى SARS-CoV-2 عند الأطفال والبالغين

متغير الأطفال بعمر ≤ 10 سنوات
n = 97
الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 سنة
n = 78
عدد الأشخاص و على الأقل XNUMX
n = 130
p القيمة
بدون أعراض ، لا. (٪) 47 (48) 19 (24) 9 (7) <0.001§
الثقافة الإيجابية ، لا. (٪ ، 95٪ CI) 18 (19 ، 11-28) 18 (23 ، 14-34) 57 (44 ، 35-53) <0.001
أعراض اختبار الوقت ، وسيط (IQR) ، د 1 (1 – 4) 2 (1 – 3.5) 2 (1 – 4) 0.6
عتبة الدورة*، متوسط ​​(IQR) 25.1 (17.7 – 31.3) 22.2 (18.3 – 29.0) 18.7 (17.9 – 30.4) <0.001**
RNAseP، يعني ± SD 25.7 2.8 ± 26.1 2.6 ± 26.1 2.0 ± 0.6
TCID50/ مل، متوسط ​​(IQR) 1171 (316 – 5620) 316 (178 – 2125) 5620 (1171-17) <0.001† †
نسخ السجل RNA / مل ، الوسيط (IQR) 5.4 (3.5 – 7.8) 6.4 (4.2 – 7.6) 7.5 (5.2 – 8.3) <0.001‡‡
  • ملحوظة: CI = فاصل الثقة ، IQR = المدى الربيعي ، RT-PCR = تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي ، SARS-CoV-2 = متلازمة الالتهاب التنفسي الحاد الوخيم 2 ، SD = الانحراف المعياري.

  • * عتبة الدورة هي مقياس معنوي لمقدار المادة الوراثية الموجودة في العينة الأولية. إذا كانت هناك حاجة إلى المزيد من دورات RT-PCR للكشف عن SARS-CoV-2 ، فحينئذٍ كان هناك عدد أقل من الحمض النووي الريبي الفيروسي في العينة.

  •  تم استخدام قيم عتبة الدورة لجين RNAse P البشري ، وهو عنصر تحكم تضخيم داخلي داخلي ، كعلامة على جودة عينة البلعوم الأنفي.

  •  جرعة معدية خمسين في المائة من زراعة الأنسجة (TCID50) هو مقياس لمعيار الفيروس المعدي ويمثل كمية الفيروس المطلوبة لقتل 50٪ من الخلايا في زراعة الأنسجة الملقحة.

  • § p القيمة <0.001 لجميع المقارنات: الأطفال أقل من 10 سنوات مقارنة بالأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 عامًا ، والأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 عامًا مقارنة بالبالغين والأطفال أقل من 10 سنوات مقارنة بالبالغين.

  •  p = 0.5 طفل 10 سنوات مقابل الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة ؛ p = 0.003 أطفال تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة مقابل البالغين ؛ p <0.001 طفل ≤ 10 سنوات مقابل البالغين.

  • ** p = 0.99 طفل 10 سنوات مقابل الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة ؛ p = 0.02 أطفال تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة مقابل البالغين ؛ p <0.001 طفل ≤ 10 سنوات مقابل البالغين.

  • † † p = 0.6 طفل 10 سنوات مقابل الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة ؛ p <0.001 من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة ضد البالغين ؛ p = 0.1 طفل ≤ 10 سنوات مقابل البالغين.

  • ‡‡ p = 0.99 طفل 10 سنوات مقابل الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة ؛ p = 0.2 أطفال تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 سنة مقابل البالغين ؛ p <0.001 طفل ≤ 10 سنوات مقابل البالغين.

 

جدول 2:

مقاييس عدوى السارس- CoV-2 في عينات الأطفال الإيجابية مقابل العينات السلبية للثقافة

متغير عدد (٪) العينات إيجابية الزرع*
n = 36
عدد (٪) العينات سلبية الزرع*
n = 139
p القيمة
العمر ، السنة ، الوسيط (IQR) 10 (5 – 15) 9 (5 – 14) 0.6
بدون أعراض ظاهرة 15 (42) 51 (37) 0.9
الجنس من الذكور 22 (61) 80 (57) 0.7
أعراض اختبار الوقت ، وسيط (IQR) ، د 1 (0 – 2) 2 (1 – 4) 0.3
عتبة الدورة، متوسط ​​(IQR) 16.8 (16.3 – 18.8) 25.8 (20.7 – 31.9) <0.001
نسخ السجل RNA / مل ، الوسيط (IQR) 8.1 (7.4 – 8.2) 5.2 (3.2 – 6.8) <0.001
  • ملحوظة: معدل الذكاء = المدى الربيعي ، RT-PCR = تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي ، SARS-CoV-2 = فيروس كورونا المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة 2.

  • * ما لم يذكر خلاف ذلك.

  •  عتبة الدورة هي مقياس معنوي لمقدار المادة الوراثية الموجودة في العينة الأولية. إذا كانت هناك حاجة إلى المزيد من دورات RT-PCR للكشف عن SARS-CoV-2 ، فحينئذٍ كان هناك عدد أقل من الحمض النووي الريبي الفيروسي في العينة.

 

لم تختلف جودة عينات البلعوم الأنفي ، كما يتضح من قيم عتبة الدورة لجين RNAse P البشري ، بين الفئات العمرية الثلاث (p = 0.6). كانت عتبة دورة جين SARS-CoV-2 E أقل عند البالغين (18.7 ، معدل الذكاء 17.9-30.4) من الأطفال بعمر 10 سنوات أو أقل (25.1 ، معدل الذكاء 17.7-31.3 ، p <0.001) أو الأطفال من سن 11 إلى 17 عامًا (22.2 ، معدل الذكاء 18.3-29.0 ، p = 0.02) (الجدول 1 و الرقم 1).

الرقم 1:

قيم عتبة دورة تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي لجين غلاف الفيروس التاجي 2 المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة حسب الفئة العمرية. كان لعينات البالغين قيمة عتبة دورة أقل بشكل ملحوظ (18.7 ، النطاق الرباعي [IQR] 17.9-30.4) من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 10 سنوات (25.1 ، معدل الذكاء 17.7-31.3 ، p <0.001) وأولئك الذين تتراوح أعمارهم بين 11 و 17 عامًا (22.2 ، معدل الذكاء 18.3-29.0 ، p = 0.02).

وسيط TCID50/ مل كان أقل بشكل ملحوظ للأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 سنة (316 ، معدل الذكاء 178-2125) من البالغين (5620 ، معدل الذكاء 1171-17 ، p <0.001) ، ولكن الاختلافات بين البالغين والأطفال بعمر 10 سنوات أو أقل (1171 ، IQR 316-5620 ، p = 0.1) لم تصل إلى دلالة إحصائية (الجدول 1 و الرقم 2).

الرقم 2:

الجرعة المعدية من زراعة الأنسجة 50٪ (TCID50/ مل) حسب الفئة العمرية. عينات البالغين كانت أعلى بكثير من TCID50/ مل (5620 ، IQR 1171-17) من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 800-11 عامًا (17 ، النطاق الربيعي [IQR] 316-178 ، p <0.001) ، ولكنها لم تكن أعلى بكثير من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 10 سنوات (1171 ، IQR 316 إلى 5620 ، p = 0.1).

لم يكن هناك فرق بين عينات الأطفال الإيجابية والسلبية للثقافة ، باستثناء قيم عتبة الدورة وتسجيل نسخ الحمض النووي الريبي / مل (الجدول 2). كانت عتبة الدورة المتوسطة أقل في العينات إيجابية الزرع (16.8 ، معدل الذكاء 16.3-18.8) من العينات سلبية الزرع (25.8 ، معدل الذكاء 20.7-31.9 ، p <0.001). كان متوسط ​​نسخ RNA لسجل الحمض النووي الريبي / مل أعلى في العينات الإيجابية للثقافة 8.1 ، معدل الذكاء 7.4-8.2) من العينات سلبية الزرع (5.2 ، معدل الذكاء 3.2-6.8 ، p <0.001). ومع ذلك ، لم تكن الأعراض المتوسطة لوقت الاختبار مختلفة بين المجموعة الإيجابية للثقافة (1 يوم ، معدل الذكاء 0-2 د) والمجموعات سلبية الثقافة (2 يوم ، معدل الذكاء 1-4 أيام ، p = 0.3). تباينت احتمالية وجود مزرعة إيجابية باختلاف الأعراض لوقت الاختبار ، مع احتمال أن تكون الثقافة الإيجابية أعلى بين العينات التي تم جمعها بعد 4-6 أيام من ظهور الأعراض ، في حين أظهرت عتبة الدورة تباينًا أقل عبر الأعراض إلى أوقات الاختبار (الرقم 3).

الرقم 3:

بداية الأعراض لوقت الاختبار (أيام) ، متوسط ​​قيمة عتبة دورة تفاعل البوليميراز المتسلسل لنسخ التبجيل لجين مغلف فيروس كورونا 2 (SARS-CoV-2) واحتمالية نجاح الثقافة الفيروسية في عينات الأطفال. تظهر احتمالية ثقافة SARS-CoV-2 من خلال القضبان الوردية. تمثل الخطوط السوداء 95٪ فترات ثقة. يتم تمثيل قيم عتبة الدورة بالخط الأزرق ، مع الدوائر التي تمثل المتوسطات والأشرطة الزرقاء تمثل 95٪ فواصل الثقة. تشير الأرقام فوق الشريط الوردي إلى عدد العينات في اليوم.

أظهر تحليل خاصية تشغيل جهاز الاستقبال (ROC) لعتبة الدورة للتمييز بين الأطفال الذين لديهم ثقافة فيروسية إيجابية وبدون ثقافة فيروسية إيجابية منطقة تحت منحنى المشغل المتلقي (AUC) تبلغ 0.87 (95٪ CI 0.81–0.93) (الملحق 1 ، الشكل التكميلي 1 ). كانت خصوصية عتبة الدورة 23 هي 97.2٪ (95٪ CI 85.8٪ -99.9٪) (الملحق 1 ، الجدول التكميلي 1). شوهدت نتائج مماثلة عند البالغين (AUC 0.89 ، 95٪ CI 0.83–0.96 ، p = 0.6 ضد الأطفال) (الملحق 1 ، التكميلي الرقم 1، الجدول التكميلي 2). لم تكن أعراض وقت الاختبار دقيقة مثل عتبة الدورة في التمييز بين العينات مع وبدون ثقافة فيروسية إيجابية (الأطفال ، AUC 0.67 ، 95٪ CI 0.55 إلى 0.79 مقابل البالغين ، AUC 0.78 ، 95٪ CI 0.68-0.88 ، p = 0.2) (الملحق 1 ، الشكل التكميلي 2) ، بخصوصية 100٪ (95٪ CI 84.5٪ -100٪) في فترة اختبار تزيد عن 6 أيام. من الجدير بالملاحظة ، أن العينة التي أجريناها كانت تضم 8 مرضى فقط يعانون من أعراض لاختبار مدة 6 أيام أو أكثر ، مما يدعو إلى التشكيك في دقة النتائج في تحديد الفترة الفاصلة للأعراض لاختبار الوقت لإيجابية ثقافة الخلية والإصابة المحتملة بسبب الإصابة. فقدان القوة.

أظهر الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات أنه ، بالنسبة لعينات الأطفال ، كانت عتبة الدورة مؤشراً مستقلاً للثقافة الإيجابية (نسبة الأرجحية 0.81 ، فاصل الثقة 95٪ 0.69 - 0.94) ، لكن الأعراض لوقت الاختبار والعمر والجنس لم تكن (الجدول 3).

جدول 3:

نموذج الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات للتدابير المرتبطة بالثقافة الفيروسية الإيجابية من عينات الأطفال

في تحليل تكميلي ، لم نجد فرقًا في معدلات إيجابية الزرع بين الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 0-4 سنوات مقارنة بالأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 5-10 سنوات. مستوى الفيروس (بناءً على TCID50/ مل) أيضًا بين العينات الإيجابية للثقافة من الأطفال في هاتين الفئتين العمريتين.

ترجمة

تظهر نتائجنا أن العينات المأخوذة من 175 طفلاً بعمر 17 عامًا أو أقل بها حوالي نصف احتمالات احتواء الفيروس القابل للزراعة مقارنةً بالعينات المأخوذة من البالغين. عندما تمت زراعة SARS-CoV-2 بنجاح ، كان متوسط ​​TCID50/ مل كان أقل بشكل ملحوظ لعينات الأطفال من البالغين ، مما يعني وجود فيروس أقل قابلية للحياة. علاوة على ذلك ، كان معدل إيجابية الثقافة لعينات من الأطفال 10 سنوات أو أقل أقل بشكل ملحوظ من الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 11-17 عامًا أو البالغين. توضح هذه النتائج أن إيجابية RT-PCR لا تعني بالضرورة إيجابية الثقافة ، حيث أن إيجابية RT-PCR وحدها لا تميز بين الفيروس الحي في مريض معدي و RNA الفيروسي المتبقي في مريض قد لا يكون معديًا.

وجدنا أن قيمة عتبة الدورة كانت تنبؤية للغاية لإيجابية الثقافة. في المقابل ، لم تكن الأعراض لاختبار الوقت قادرة على التمييز بين الأطفال ذوي الثقافات الإيجابية والسلبية. وبالتالي ، في الأطفال الذين ثبتت إصابتهم بفيروس SARS-CoV-2 بواسطة RT-PCR ، قد تكون معرفة قيمة عتبة الدورة أكثر إفادة لتحديد العدوى المحتملة للطفل ، وقد يكون لها آثار على مدة العزلة.

تتعارض هذه النتائج مع ما لوحظ مع فيروسات الجهاز التنفسي الأخرى التي غالبًا ما تنذر العدوى والانتقال الفعال لدى الأطفال بانتقالها على نطاق واسع في المجتمع. ومع ذلك ، تتوافق هذه النتائج مع الدراسات الوبائية التي تظهر انتشار فيروس SARS-CoV-2 المحدود من الأطفال الذين تقل أعمارهم عن 10 سنوات.16,17 أظهرت دراسة حديثة عن الانتشار المصلي من ألمانيا أن الأطفال ، وخاصة أولئك الذين تتراوح أعمارهم بين 1-10 سنوات ، لديهم إيجابية مصلية أقل بكثير من والديهم ، مما يجعل العدوى غير المصحوبة بأعراض أقل احتمالية.18 أظهر التحليل التلوي أن الأطفال لديهم قابلية أقل للإصابة بـ SARS-CoV-2 وقد لا يقودون انتقال المجتمع إلى نفس درجة البالغين.19 الفيروس التاجي 2 للمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة له أيضًا رقم تكاثر مفرط التشتت (R.O) ، مما يشير إلى أن ديناميات انتقاله تختلف اختلافًا جوهريًا عن فيروسات الجهاز التنفسي الموسمية الوبائية.20-22 يشير التشتت المفرط إلى تباين كبير على المستوى الفردي في توزيع عدد عمليات الإرسال الثانوية ، مما قد يؤدي إلى ما يسمى بأحداث "الانتشار الفائق".21

نظر آخرون في القدرة على إنماء فيروس حي من عينات الأطفال ، وهو المعيار الذهبي للتشخيص الميكروبيولوجي. قام L'Huillier وزملاؤه بتنمية فيروس حي من نسبة أعلى من عينات الأطفال مقارنة بدراستنا (52٪ ؛ 12/23 ، 31٪ في عيناتنا المجمعة).11 كانت النتائج التي توصلوا إليها حول الأعراض لوقت الاختبار مماثلة لما لاحظناه ، و 95٪ من مجالات الموثوقية من نتائجنا تتداخل تقريبًا مع نتائجهم ، مما يشير إلى أن حجم العينة الأصغر قد يكون مسؤولاً عن نسبتهم الأعلى من النتائج الإيجابية للثقافة. ومع ذلك ، يكشف الفحص الدقيق لبيانات L'Huillier أنه ، بما يتوافق مع دراستنا الحالية ، تتفاوت إيجابية الثقافة مع العمر ، مثل أن الفيروس تمت استزراعه من 4 فقط من 11 (36.4 ٪) من الأطفال الذين تبلغ أعمارهم 10 سنوات أو أقل ، ولكن 8 من 12 (66.6٪) أطفال بعمر 11 سنة فأكثر. إدراكًا أن عتبة الدورة هي بديل محدود للحمل الفيروسي ، فقد حاولت دراسات أخرى تحديد الحمل الفيروسي عند الأطفال باستخدام نسخ RNA / مل بناءً على منحنيات معيارية. على الرغم من أن هذا النهج يحسن القدرة على مقارنة البيانات عبر الوقت والمختبرات ، إلا أنه يظل مقياسًا بديلًا للحمل الفيروسي القابل للحياة ، ولا يمكنه التنبؤ بالفيروس الحي القابل للاسترداد ، كما أنه عرضة للارتباك من خلال التخلص من المواد الوراثية الفيروسية غير المعدية. على هذا النحو ، فإن الاستنتاجات من مقاييس الحمل الفيروسي المستمدة من بيانات عتبة الدورة لها قيود كبيرة. قمنا بتحديد الوجود الفيروسي من خلال استخدام TCID50/ مل ، والذي يوفر قوة تمييزية إضافية مقارنة بالطرق التي تقصر التحليل على وجود أو عدم وجود تأثير الاعتلال الخلوي.11

إن ملاحظة قيمة عتبة الدورة التي تزيد عن 23 تشير إلى انخفاض كبير في خطر استعادة الفيروس الحي تستحق الدراسة في دراسة أكبر. تتوافق هذه القيمة مع عملنا السابق الذي أظهر انخفاض القدرة على زراعة فيروس حي في عينات البالغين حيث كانت عتبة الدورة أكبر من 24.12 أخيرًا ، يجب إجراء تحديد فترة توقف قوية قائمة على الأعراض لإيجابية ثقافة الخلية ، على الرغم من أن الاختبار يحدث غالبًا بعد وقت قصير من ظهور الأعراض. قد يكون من الصعب الإجابة على هذا السؤال في بيئة اختبار COVID-19 الحالية.

القيود

ينبغي النظر في التفسيرات المحتملة الأخرى لنتائجنا. قد يلعب الاختلاف الجيني الفيروسي دورًا ؛ ومع ذلك ، تُظهر المراقبة الجينومية أن العينات تمثل السلالات العالمية المتنوعة الموجودة في الموجات الأولية واللاحقة للحالات في مانيتوبا. قد يكون جمع العينات من الأطفال أمرًا صعبًا ، مما يؤدي إلى عينة دون المستوى الأمثل. ومع ذلك ، فإن عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في قيم عتبة دورة RNAse P (عنصر تحكم داخلي داخلي) ، يشير إلى جودة أخذ العينات مماثلة عبر الفئات العمرية. تم أيضًا النظر في تدهور العينات أثناء التخزين ، مما يؤثر على فرصة الشفاء الفيروسي ، ولكن الوقت المستغرق في زراعة الخلايا كان متشابهًا عبر الفئات العمرية ، مما يجعل هذا الاحتمال غير مرجح.

على الرغم من أن الأطفال الصغار لديهم أعراض مماثلة لوقت الاختبار ، فقد يكون الأطفال أكثر عدوى في وقت مختلف بعد التعرض عن المراهقين أو البالغين. لا يدعم علم الأوبئة المحلي لدينا (بيانات غير منشورة ، 2021) هذه الحجة ، لأن حالات الأطفال من COVID-19 متوافقة مع انتقال المجتمع.23,24 من الممكن أن يكون الأطفال عند نقطة مختلفة في مسار الفيروس بالنسبة للمراهقين والبالغين عندما تم أخذ عيناتهم. نظرًا لأنه تم أخذ عينة واحدة فقط ، فلن يكون من الممكن تحديد الاتجاه الطولي في قيمة عتبة الدورة بالنسبة إلى وقت أخذ العينات. لم يُظهر تحليل الانحدار (البيانات غير معروضة) من البالغين والأطفال أي ارتباط بين الأعراض لوقت الاختبار وعتبة الدورة أو TCID50/ قيمة مل. من الممكن تذكر تحيز ظهور الأعراض وقد تكون الأعراض خفية عند الأطفال ، مما يؤدي إلى تفاقم تحيز الاسترجاع ، ولكن من المحتمل أن يتم توزيع ذلك بالتساوي بين جميع المرضى. أخيرًا ، لا يمكننا التأكد من أن النتائج التي توصلنا إليها تنطبق على متغيرات SARS-CoV-2 الجديدة التي أظهرت مستويات أعلى من العدوى ، حيث لم تكن هذه المتغيرات منتشرة بشكل شائع خلال فترة الدراسة.

خلاصة

وجدنا أن SARS-CoV-2 نما من عينات الأطفال أقل من عينات البالغين ، وعندما تم زراعة الفيروس بنجاح ، كان الفيروس أقل قابلية للحياة بشكل ملحوظ. تشير هذه البيانات ، جنبًا إلى جنب مع علم الأوبئة المحلي لدينا ، إلى أن الأطفال لا يبدو أنهم المحركون الرئيسيون لانتقال فيروس SARS-CoV-2. النتائج التي توصلنا إليها لها آثار هامة على الصحة العامة والسريرية. إذا كان الأطفال الأصغر سنًا أقل قدرة على نقل الفيروسات المعدية ، فقد تكون الرعاية النهارية والمدرسة الشخصية والأنشطة الحذرة اللامنهجية آمنة للاستمرار ، مع اتخاذ الاحتياطات المناسبة ، مع مخاطر أقل على موظفي رعاية الأطفال والمعلمين وموظفي الدعم مما كان متوقعًا في البداية. نظرًا للصعوبات في إبقاء الأطفال معزولين داخل بيئة المنزل والتأثير الكبير للعزلة المطولة على كل من نمو الطفل ووظيفة الوالدين (مثل فقدان العمل أو الدخل) ، فإن الأداة القوية لتقليل طول أو الحاجة إلى الحجر الصحي أن تكون تنمية هامة للصحة العامة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال الجهود التعاونية في استجابة الصحة العامة لوباء COVID-19 من قبل مانيتوبا هيلث ومختبر مقاطعة كادهام ووكالة الصحة العامة الكندية والمختبر الوطني للأحياء الدقيقة. يشكر المؤلفون أيضًا المعلمين والمربين الذين حافظوا على بعض الحياة الطبيعية لأطفال مانيتوبا والأطفال أنفسهم.

الحواشي

  • تضارب المصالح: تقرير لورين غارنيت ، وكايلي تران ، وأليكس بيلو ، وجيمس سترونج ، عن تمويل أساسي من حكومة كندا. لم يتم الإعلان عن أي مصالح أخرى متنافسة.

  • تمت مراجعة هذه المقالة من قبل الأقران.

  • المساهمين: ساهم جميع المؤلفين في وضع تصور للعمل وتصميمه واكتساب البيانات وتحليلها وتفسيرها. قام جميع المؤلفين بصياغة المخطوطة ومراجعتها بشكل نقدي لمحتوى فكري مهم ، وأعطوا الموافقة النهائية على النسخة التي سيتم نشرها ووافقوا على أن يكونوا مسؤولين عن جميع جوانب العمل.

  • تبادل البيانات: لا يمكن مشاركة البيانات التي تحتوي على معلومات صحية شخصية محتملة بواسطة Manitoba Health ويتم تنظيمها من قبل لجنة خصوصية المعلومات الصحية (HIPC) بموجب قانون معلومات الصحة العامة في مانيتوبا. عند الطلب ، يمكن تقديم البيانات التي تم إخفاء هويتها بشكل مناسب للباحثين من خلال التشاور مع المؤلف المقابل.

  • مقبول مسيرة 30، 2021.

هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه وفقًا لشروط ترخيص Creative Commons Attribution (CC BY-NC-ND 4.0) ، والذي يسمح بالاستخدام والتوزيع والاستنساخ في أي وسيط ، بشرط ذكر المنشور الأصلي بشكل صحيح ، والاستخدام غير تجاري (أي استخدام بحثي أو تعليمي) ، ولم يتم إجراء أي تعديلات أو تعديلات. ارى: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

مراجع

المصدر مجلة الجمعية الطبية الكندية

اشتراك
إخطار
guest
8 التعليقات
أقدم
الأحدث معظم صوت
التقيمات المضمنة
عرض جميع التعليقات

ken
كين
قبل أيام

(روفلول)

كيف سيتعرفون على الفيروس؟

لم يتم تنقيته مطلقًا إلى فيروس واحد ، وبالتالي فإن تسلسل الجينوم الخاص به غير معروف.

aardvark-gnosis
عضو نشط
aardvark-gnosis (@ aardvark-gnosis)
قبل أيام

بناءً على ما كنت أقرأه .. قال مبتكر اختبار PCR ، "لم يتم تصميم هذا الاختبار أبدًا ليتم استخدامه بالطريقة التي يتم استخدامه بها". ومع ذلك ، لا يزال الناس يصطفون للاختبار مثل الأغنام للذبح ... المعلومات الفرعية مليئة بالمعلومات الخاطئة والأكاذيب الصريحة!

انظر كيف تؤدي الأكاذيب إلى التعيين المهني الموضح في عنوان URL هذا
< https://www.cracknewz.com/2021/10/were-in-middle-of-major-biological_10.html >

كن الحكم وقم بأبحاثك الخاصة ... يجب أن تكره حدسيتك وحسك السليم ، إن وجد ، الروح البديهية العميقة الجذور لتمييز المعرفة دون الحاجة إلى تعليمها وتكييفها باستثناء الواقع أو المصفوفة المتغيرة كحقيقة!

اي جي

تم التعديل الأخير بواسطة aardvark-gnosis منذ 15 أيام
brtanner
عضو
بريتانر (brtanner)
قبل أيام

لم يتم استزراع أي فيروس بنجاح في خط خلية في المختبر. إذا قرأت أي أوراق تدعي وجودها ، فسترى أنه لم يكن هناك عزل "لفيروس" أو استخراج أي مواد وراثية.

Daz
دياز
قبل أيام

كما كنت أقول لمدة 18 شهرًا - احتيال كامل ومطلق.
لم يكن Covid موجودًا أبدًا خارج الكلمة البرمجية pysop للإنفلونزا.

Curmudgeon
عابس
قبل أيام

أعيش في مانيتوبا. الخوف من الإباحية منتشر. غاب عن هذه "الدراسة" حقيقة أن الدكتور راينر فويلميتش اكتشف ، قبل الدراسة بكثير ، أن "الفيروس" كان نموذجًا تم إنشاؤه بواسطة الكمبيوتر. بدأت كريستين ماسي في متابعة السلسلة الغذائية من السلطات الصحية المحلية إلى الحكومة الفيدرالية للحصول على معلومات حول عزل الفيروس. ها هو الرد:
https://www.fluoridefreepeel.ca/wp-content/uploads/2020/06/Health-Canada-FinalResponse-A-2020-00208-2020-06-13.pdf
هذا يطرح السؤال ، ما الذي كانوا يحاولون تطويره للدراسة؟

Rog
ROG
قبل أيام

ما ورد أعلاه هو التهام الطبي الذي قدمته لك وزارة التشويش والتفكير المزدوج وهي ليست مسؤولة عن أي محتوى غير دقيق.

yuri
يوري
قبل أيام

استنتاجات الفودو من قبل الفلاحين المؤيدين للإمبراطورية ... فيروس الأنفلونزا ليس موجودًا فقط ولكن تم إنتاج لقاحات فعالة وغير ضارة .... لقاحات Covid التي ابتكرها الغرب تثري المليارديرات وتنتج العديد من الآثار الجانبية

مكافحة الإمبراطورية